- CsCl 密度梯度离心法大量提取质粒DNA 所属分类:质粒提取 日期:2012-03-24 点击:93 顶:0 采用CsCl 密度梯度离心法大量提取质粒DNA的具体操作步骤. Read More >>
- 质粒DNA提取及琼脂糖凝胶电泳检测 所属分类:质粒提取 日期:2012-03-22 点击:182 顶:0 本实验用碱变性方法提取质粒DNA,再用琼脂糖凝胶电泳进行分离纯化. Read More >>
- 重组质粒的提取 所属分类:质粒提取 日期:2011-02-28 点击:371 顶:0 应用酶学的方法,在体外将目的基因与载DNA结合成一具有处我复制能力的DNA分子(重组体),继而通过转化或转染宿主细菌或细胞、筛先出含有目的基因的转化子细菌或细胞,再进行扩增、提取获得大量同一DNA分子。重组质粒的提取在这一基因工程中起到重要作用。本文介绍了E.Z.N.A Plasmid Extraction Kit质粒提取的实验步骤。 Read More >>
- 质粒DNA分离方法比较(以E.Coli为例) 所属分类:质粒提取 日期:2010-09-30 点击:343 顶:0 质粒提取是生物实验中非常基础和常用的实验技能,本文将介绍发酵后的E.Coli培养液用低速大容量冷冻离心机,大容量甩平或角式转头(3000~6000rpm,30~15min)或高速连续流转头(10000~18000rpm,流量300~600ml/min)E.Coli菌体沉淀,提取相关质粒方法的比较. Read More >>
- 质粒的提取和纯化实验中的注意事项 所属分类:质粒提取 日期:2010-02-06 点击:734 顶:3 该实验成功的标志是把染色体DNA、蛋白质与RNA去除干净,获得一定得率的质粒DNA.去掉染色体DNA最为重要.实现以上目的,实验过程中一定要注意以下方面的操作. Read More >>
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质粒DNA的提取方法
所属分类:质粒提取 日期:2010-02-06 点击:731 顶:3
质粒DNA的提取方法主要有碱裂解法,煮沸法,酚氯仿裂解法,碱裂解法.跟据不同的实验目的和仪器设备择取不同的实验方案.
Read More >> - 质粒实验常见问题分析 所属分类:质粒提取 日期:2010-02-04 点击:978 顶:2 质粒在分子生物实验中起到举足轻重的作用,关系着整个实验的成功与否,常握质粒实验中常见的问题,重视实验的细节,比如涂布棒在酒精蘸一下,然后烧一下,能不能保证把所用的菌烧死?质粒得率低如何解决?等等.本文教你如何撑控这些常见的实验问题. Read More >>
- 在质粒载体中进行定向克隆 所属分类:质粒提取 日期:2009-09-22 点击:602 顶:13 大多数常用质粒都含有可被不同内切酶识别的多克隆位点。由于可供选择的克隆位点很多,因此一般来说总是能找到一个带有与某一特定外源DNA片段末端相匹配的酶切位点的质粒载体,定向克隆通常需要质粒和目的DNA片段两酶切位点不相匹配. Read More >>
- 用有机溶剂抽提法从DNA中除去溴化乙锭 所属分类:质粒提取 日期:2009-09-22 点击:232 顶:10 欲从经 CsCl 梯度纯化的 DNA 中去除溴化乙锭,常用有机溶剂反复抽提的方法.随着可用透析或沉淀的方法除去 CsCl .提供了一种用离子交换层析去除 CsCl 的方法.这两种方法均能从经 CsCl- 溴化乙锭梯度平衡离心所纯化的 DNA 中有效地去除溴化乙锭. Read More >>
- 氯化铯-溴化乙锭梯度平衡离心法纯化闭环DNA:连续梯度法 所属分类:质粒提取 日期:2009-09-22 点击:755 顶:12 连续梯度离心中,将溴化乙锭和粗制质粒 DNA 与密度约为 1.55 的 CsCl 溶液混匀.当混合物以高速离心时,离心力足以产生并维持铯离子的梯度.在梯度形成过程中,不同浮力密度的 DNA 进入与其带有相同密度的 CsCl 层.欲达平衡梯度,以往需要离心 24-28h ;但由于现代的垂直管转头离心力高,直径小,因而其梯度的形成比用旧事的低速固定角度的转头快的多. Read More >>
- 层析法纯化质粒DNA 所属分类:质粒提取 日期:2009-09-22 点击:379 顶:13 纯化质粒所需要树脂的量取决于细菌裂解液的量.目前市场上可购买到的纯化质粒 DNA 的试剂盒有三种规格,分别用于 DNA 的小量制备( 1-10ml 菌液)、中量制备( 10-100ml )和大量制备(多于 100ml ).市场上既有由用户自己装配的散装树脂,也有可直接用于纯化的预制柱. Read More >>
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聚乙二醇沉淀法纯化质粒DNA
所属分类:质粒提取 日期:2009-09-22 点击:623 顶:11
这种方法最早用Richaed Treisman参照Lis的工作而设计。Lis是最早用聚乙二醇(PEG)分离不同大小DNA的人。Treisman法被广泛用于碱裂解法制备的质粒DNA的纯化。这里介绍一种改了的Treisman法:用PEG和MgCl2溶液沉淀质粒DNA.
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